1.目的:明確潔凈區(qū)(室)沉降菌的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)范潔凈區(qū)(室)沉降菌的檢驗操作方法

2.適用范圍：潔凈區(qū)(室)沉降菌的控制和測試方法，及車間潔凈室和潔凈區(qū)無菌室或無菌區(qū)域（包括潔凈工作臺）的沉降菌的測定和環(huán)境的驗證。

3.責(zé)任者：質(zhì)量控制部潔凈區(qū)(室)沉降菌檢驗操作人員車間QC檢驗操作人員。

4.操作內(nèi)容和方法：

4.1.定義：

4.1.1菌落

4.1.1.1細(xì)菌培養(yǎng)后，由一個或幾個細(xì)菌繁殖而形成的一細(xì)菌集落，簡稱CFU，通常用個數(shù)表示。

4.1.1.2沉降菌

⑴ 用規(guī)定的方法收集到的活微生物粒子，通過專用的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。

4.2.應(yīng)對微生物進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測，評估無菌生產(chǎn)的微生物狀況。

4.2.1監(jiān)測方法有沉降菌法、定量空氣浮游菌采樣法和表面取樣法（如棉簽擦拭法和接觸碟法）等。

4.2.2動態(tài)取樣應(yīng)當(dāng)避免對潔凈區(qū)造成不良影響。成品批記錄的審核應(yīng)當(dāng)包括環(huán)境監(jiān)測的結(jié)果。

4.2.3對表面和操作人員的監(jiān)測，應(yīng)當(dāng)在關(guān)鍵操作完成后進(jìn)行。在正常的生產(chǎn)操作監(jiān)測外，可在系統(tǒng)驗證、清潔或消毒等操作完成后增加微生物監(jiān)測。

4.2.4潔凈區(qū)微生物監(jiān)測的動態(tài)標(biāo)準(zhǔn)(1)如下：

4.2.4.1表中各數(shù)值均為平均值。

4.2.4.2單個沉降碟的暴露時間可以少于4小時，同一位置可使用多個沉降碟連續(xù)進(jìn)行監(jiān)測并累積計數(shù)。

4.3.沉降菌測試操作方法：

4.3.1潔凈區(qū)沉降菌控制限度：

4.3.2、測試操作方法：

4.3.2.1本測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)平皿，經(jīng)若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進(jìn)行計數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈區(qū)的潔凈度。

4.3.2.2所用的儀器和設(shè)備

⑴ 高壓消毒鍋：使用時應(yīng)嚴(yán)格按照儀器說明書操作。

⑵ 恒溫培養(yǎng)箱： 必須定期對培養(yǎng)箱的溫度計進(jìn)行檢定。

⑶　培養(yǎng)皿：　一般采用Ф90mm×15mm的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。

⑷　培養(yǎng)基：普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基（微生物限度檢查法）或其他藥典認(rèn)可的培養(yǎng)基。

4.3.3.測試操作步驟：

4.3.3.1采樣操作方法：將已制備好的培養(yǎng)皿按4.2.4.2的要求放置，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露4h，再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒置。

4.3.3.2培養(yǎng)。

⑴ 全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

⑵ 在30℃–35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于72h。

⑶ 每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染。可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。

4.3.3.3菌落計數(shù)：

⑴　用肉眼直接計數(shù)，標(biāo)記或在菌落計數(shù)器上點(diǎn)計，然后用5—10倍放大鏡檢查，有否遺漏。

⑵　若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。

4.3.3.4.操作注意事項：

⑴ 測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。

⑵ 采取一切措施防止人為對樣本的污染。

⑶ 對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。

⑷ 由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。

⑸ 采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。

4.3.4.、測試操作規(guī)則。

4.3.4.1測試操作狀態(tài)。

⑴　沉降菌測試前，被測試潔凈室的溫濕度須達(dá)到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。

⑵　沉降菌測試前，被測試潔凈室已經(jīng)過消毒。

⑶　測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。

4.3.4.2測試人員

⑴ 測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈級別的工作服。

⑵ 靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于二人。

4.3.4.3．測試時間：

⑴ 對單向流，如A級凈化房間及層流工作臺，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10min后開始。

⑵ 對非單向流,如C級、D級以上的凈化房間，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30min后開始。

4.3.4.4.沉降菌計數(shù)：

⑴　采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置。

⑵　最少采樣點(diǎn)數(shù)目(沉降法的最少采樣點(diǎn)數(shù)可按表1確定)：。

表1????最少采樣點(diǎn)數(shù)目

⑶?在滿足最少測點(diǎn)數(shù)的同時，還應(yīng)滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見表2

表2???最少培養(yǎng)皿數(shù)

4.3.4.5.采樣點(diǎn)的布置。

⑴ 采樣點(diǎn)的位置可以同懸浮粒子測試點(diǎn),采樣點(diǎn)的布置圖示如下：

A1潔凈棚（層流罩），潔凈工作臺等局部空氣凈化設(shè)施的采樣點(diǎn)布置：

A1.1?水平單向流

A1.2?垂直單向流

⑶ 可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加采樣點(diǎn)。

⑵ 工作區(qū)采樣點(diǎn)的位置離地0.8m—1.5m左右（略高于工作面）。

4.4、記錄

4.4.1測試報告中應(yīng)記錄房間溫度、相對濕度、壓差及測試狀態(tài)。

4.4.2測試報告的編寫見標(biāo)準(zhǔn)的附錄

4.5、結(jié)果計算。

4.5.1用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。

4.5.2平均菌落數(shù)的計算，見式（1）

M1+M2+…Mn

平均菌落數(shù)M=──────……………（1）

n

式中：M—-平均菌落數(shù)，

M1—-1號培養(yǎng)皿菌落數(shù)，

M2—-2號培養(yǎng)皿菌落數(shù)，

Mn—-n號培養(yǎng)皿菌落數(shù)，

n—-培養(yǎng)皿總數(shù)。

4.6、結(jié)果評定:

4.6.1用平均菌落數(shù)判斷潔凈室空氣中的微生物;

4.6.1.1潔凈室內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評定標(biāo)準(zhǔn)。

4.6.1.2若某潔凈區(qū)內(nèi)的平均菌落數(shù)超過評定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對此區(qū)域先進(jìn)行消毒，然后重新采樣兩次，測試結(jié)果均須合格。